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首先，随后，通过多种Cre/FLPo鼠系（如 Tac1, Tacr1, Pdyn, Nmur2）的对比示踪实验，证实只有Sp5C中的Tac1神经元（Sp5CTac1）能大量投射到PBN。更深入的狂犬病毒（RV）逆向示踪与光遗传学电生理记录显示，Sp5CTac1神经元与 PBNTac1神经元之间存在直接的单突触兴奋性连接。最关键的是，在三叉神经痛（CION）模型中，这条Sp5CTac1 → PBNTac1通路的突触连接强度显著增强。
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其次，作者给孕鼠注射VPA成功诱导出自闭症小鼠模型，雄性小鼠的自闭症症状（社交差、爱反复理毛）更明显，还伴有焦虑，雌性症状较轻，后续只研究雄性。
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